CAH StripAssay® firmy ViennaLab to zestaw diagnostyczny CE-IVD przeznaczony do ukierunkowanej analizy mutacji w genie CYP21A2, związanych z wrodzonym przerostem nadnerczy (CAH, congenital adrenal hyperplasia). Test opiera się na amplifikacji PCR oraz hybrydyzacji odwrotnej na paskach StripAssay®.
Wrodzony przerost nadnerczy jest chorobą dziedziczoną autosomalnie recesywnie. W większości przypadków przyczyną choroby są defekty molekularne genu CYP21A2, kodującego 21-hydroksylazę steroidową. Zaburzenie aktywności tego enzymu wpływa na biosyntezę kortyzolu i aldosteronu oraz może prowadzić do nadprodukcji prekursorów steroidowych.
Zestaw umożliwia analizę 11 częstych mutacji genu CYP21A2:
- P31L — c.92C>T
- I2 splice — c.293-13A/C>G
- Del 8 bp E3 — c.332_339del
- I173N — c.518T>A
- Cluster E6 — c.710T>A, c.713T>A, c.719T>A
- V282L — c.844G>T
- L308fs — c.923dup
- Q319X — c.955C>T
- R357W — c.1069C>T
- P454S — c.1360C>T
- R484P — c.1451G>C
Test pozwala na rozróżnienie układów prawidłowych, heterozygotycznych oraz homozygotycznych dla analizowanych wariantów.
CAH StripAssay® może być stosowany jako pomoc w potwierdzaniu obecności mutacji CYP21A2 u pacjentów z podejrzeniem wrodzonego przerostu nadnerczy. Producent wskazuje także możliwość użycia testu jako badania drugiego rzutu w programach przesiewowych noworodków.
Obraz kliniczny CAH zależy od ciężkości mutacji CYP21A2 i może obejmować klasyczną postać z utratą soli, klasyczną postać wirylizującą oraz łagodniejsze postacie nieklasyczne. Wynik badania powinien być interpretowany łącznie z fenotypem pacjenta, wynikami badań hormonalnych oraz innymi informacjami klinicznymi.
CAH StripAssay® wykrywa częste warianty punktowe oraz małą delecję w genie CYP21A2. Producent zwraca uwagę, że część patogennych zmian w CYP21A2 obejmuje duże delecje, duplikacje lub geny chimeryczne. Dlatego dla pełniejszej diagnostyki zalecane jest uzupełnienie badania o analizę liczby kopii genu CYP21A2, np. z użyciem CAH RealFast™ CNV Assay lub metodą MLPA.
Technologia ViennaLab StripAssay® obejmuje izolację DNA, amplifikację PCR z użyciem biotynylowanych starterów oraz hybrydyzację produktów PCR z allelospecyficznymi sondami unieruchomionymi na pasku testowym. Związane sekwencje są wykrywane przy użyciu streptawidyny sprzężonej z fosfatazą alkaliczną oraz substratów barwnych.
W przypadku CAH StripAssay® dla każdej próbki wykonywane są trzy oddzielne reakcje PCR: A, B i C. Następnie produkty amplifikacji są analizowane na jednym pasku testowym.
| Cecha | Specyfikacja |
|---|
| Metoda analityczna | PCR + reverse-hybridization |
| Technologia | ViennaLab StripAssay® |
| Materiał badany | DNA z krwi obwodowej lub suchej kropli krwi |
| Gen docelowy | CYP21A2 |
| Obszar diagnostyczny | Wrodzony przerost nadnerczy, CAH |
| Liczba analizowanych mutacji | 11 |
| Liczba reakcji PCR na próbkę | 3 reakcje: A, B i C |
| Formaty zestawu | 20 testów, 48 testów, 5 testów trial |
| Temperatura przechowywania | 2–8°C |
| Status produktu | CE-IVD |
Zestaw obejmuje najczęściej analizowane warianty genu CYP21A2 związane z wrodzonym przerostem nadnerczy.
Test może wspierać potwierdzanie mutacji CYP21A2 u pacjentów z podejrzeniem CAH oraz uzupełniać diagnostykę przesiewową noworodków.
Zestaw może być stosowany z DNA izolowanym z krwi obwodowej lub z suchej kropli krwi, co jest szczególnie istotne w kontekście badań noworodkowych.
Połączenie PCR i hybrydyzacji paskowej pozwala na czytelną interpretację wyniku na podstawie wzoru prążków na pasku testowym.
W celu pełniejszej oceny genu CYP21A2 test może być łączony z analizą liczby kopii genu, np. CAH RealFast™ CNV Assay.
